Иммуноферментный анализ — ИФА

Иммуноферментный анализ позволяет определять концентрации различных веществ в растворах. Таким образом измеряют концентрации гормонов, антител, антигенов и диагностируют заболевания.

В зарубежной литературе синонимом иммуноферментного анализа (ИФА) является аббревиатура ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay).

Следует помнить, что результаты ИФА не является самостоятельным основанием для постановки диагноза, потому что не всегда позволяют отличить имеющуюся и перенесенную болезнь, а также установить локализацию патологического процесса.

Чувствительность и специфичность серологических методов у новорожденных существенно ниже, чем у детей старшего возраста и взрослых, что связано с особенностями иммунного ответа и присутствием в их крови материнских антител.

У пациентов с симптомами заболевания для диагностики или контроля излеченности следует отдавать предпочтение прямым методам исследования, которые устанавливают наличие подозреваемого возбудителя, а не антител к нему, так что метод ИФА в данном случае находится на втором плане.

При выявлении специфических иммуноглобулинов в сыворотке крови устанавливается предварительный диагноз, а при положительном результате прямых методик исследования выставляется окончательный диагноз.

В основе иммуноферментного анализа (ИФА) лежит иммунное взаимодействие антигена с  антителом, которое проходит в несколько этапов.

Первый этап

Первая реакция ИФА происходит между иммуноглобулинами сыворотки пациента и антигеном возбудителя, фиксированным к поверхности лунок иммунологического планшета. После завершения первой реакции планшет отмывается, а на стенках лунок остается комплекс антиген-антитело.

Второй этап

Для выявления образовавшихся иммунных комплексов проводят вторую иммунологическую реакцию ИФА, в которой антигеном является связанный комплекс, а антителом — специфический к соответствующему иммуноглобулину (Ig) человека животный иммуноглобулин (кроличий), меченный ферментом (пероксидазой).

Третий этап

После завершения второй иммунологической реакции лунки планшета повторно отмываются и подвергаются третьему этапу — ферментативной реакции с хромогеном (ортофенилендиамин — ОФД или тетраметилбензидин — ТМБ). В результате реакции образуется цветное вещество, интенсивность окраски которого определяется анализатором.

Чем выше оптическая плотность в данной лунке, тем большее количество специфических антител содержится в соответствующей пробе и, следовательно, выше является титр анализируемой сыворотки. При отсутствии в сыворотке исследуемых антител лунки остаются неокрашенными.

Оценка результата

Результат иммуноферментного анализа сравнивается со значением критической оптической плотности («нормой»). Конечно, для каждой постановки будет своя величина критической оптической плотности. Сравнивать абсолютные значения оптической плотности при различных критических величинах некорректно. Правильнее сравнивать относительные значения кратности оптической плотности пробы сыворотки больного к критической оптической плотности в данной постановке, (оптическую плотность пробы сыворотки больного разделить на критическую оптическую плотность).

Сравнение данных, полученных в разных лабораториях, в которых применялись различные реактивы или модификации постановок, некорректно, особенно, если результаты представлены в разных единицах измерения.

Преимущества

1. высокая чувствительность и специфичность
2. воспроизводимость
3. унифицированность
4. малоинвазивность
5. пригодность для массовых обследований

Возможность инструментальной оценки результатов иммуноферментного анализа также устраняет фактор субъективности.

Иммуноферментный анализ (ИФА) лежит в основе, так называемых, быстрых экспресс-тестов, когда реакция проходит на тест-полоске. Окраска продуктов реакции сравнивают со стандартной цветной шкалой: чем интенсивнее окраска, тем выше концентрация антител.

Недостатки экспресс-метода ИФА

1. субъективность оценки результатов анализа,
2. низкая чувствительность (25-65%), в связи с чем диагностируется лишь один случай болезни из четырех.

Поэтому экспресс-тесты не рекомендованы для широкого применения и должны проверяться с помощью аппаратного ИФА и других методов.