Лабораторная диагностика аллергии

Обычные аллергические тесты в условиях лаборатории заключаются в исследовании крови или других жидкостей организма (например, назального секрета) с целью оцен­ки иммунологической реактивности. Лабораторные тесты на аллергию могут использоваться для скрининга аллергии и вы­явления потенциальных аллергенов.

В некоторых случаях анализы применяются в дополнение к кожным тестам уколом или же заменяют их, особен­но если есть следующие противопоказания к прове­дению последних:

• пациент — маленький ребенок
• у пациента обширное кожное заболевание и невоз­можно выбрать свободный участок кожи для тес­тирования
• у пациента существует риск развития анафилак­сии при проведении кожных проб
• редко встречающийся аллерген, стандартный рас­твор которого в данный момент недоступен
• пациенту нельзя прекращать текущую антигистаминную терапию.

Иммуноглобулин Е

Для измерения количества иммуноглобулина Е (IgE), выделяемого в ответ на воздействие специфического антигена, су­ществует несколько методов:

• простой метод полуколичественного анализа, та­кой как тестовые полоски или метод иммунодота, при котором аллерген точечно наносят на нитроцеллюлозные полоски
• более сложные процедуры, такие как радиоаллергосорбентный тест (RAST) или твердофазный иммуноферментный тест (ИФА, ELISA).

В основе всех этих тестов лежит один и тот же прин­цип. Тестируемый антиген фиксируется на носителе (тест-полоска или диск для аллергических проб). Те­стируемые соединения инкубируются вместе с сы­вороткой пациента, которая может содержать анти­тела к аллергену, что приведет к образованию комплекса антиген-антитело. Эти комплексы метят­ся анти-IgE антителами, после чего их можно иден­тифицировать с помощью хромогенного вещества или радиоактивных меток путем измерения на сцинтилляционном счетчике.

Общий иммуноглобулин Е

Измерение сывороточного иммуноглобулина Е (IgE) помогает лишь сориентироваться в ситуации, когда идет поиск предполагаемого аллергена. В норме содержание IgE в сыворотке крови 17-240 нг/мл (2,4 нг/мл = 1 МЕ/мл). Если количество иммуноглобулина Е IgE превышает 170 нг/мл (70 МЕ/мл), можно подозревать наличие аллергии, однако у многих здоровых людей этот показатель намного выше, и они не имеют на аллергии, ни атопии.

У некоторых пациентов, обычно страдающих аллерги­ческим или атопическим заболеванием, этот уровень превышает 10 000 МЕ/мл. Повышенный уровень IgE обнаруживают также при:

• паразитарных инфекциях,
• легочном аспергиллезе,
• врожденном иммунодефици­те,
• иммуносупрессиях – угнетении иммунитета,
• реакции отторжения транс­плантата,
• при тяже­лых ожогах.

Обычно уровень IgE измеряют с помощью метода ELISА (ИФА).

Мультитесты

При скрининге аллергенов наиболее удобны системы, в которых различные аллергены связаны с одним носителем. В этих целях использу­ются как диски, так и растворы, содержащие аллер­гены. Данный тест очень экономичен и удобен.

Если в лабораторных тестах на аллергию не выявлено выраженной сенсиби­лизации, необходимо использовать другие, более прямые методы (кожная проба уколом, определение специфического IgE).

Тест-полоски содержат меньше антигенов и менее точны.

Специфический иммуноглобулин Е

Количественное определение специфического иммуноглобулина Е (IgE, один из видов глобулинов крови), направленного против опреде­ленного антигена, проводят с помощью RAST или других подобных тестов. При этом можно проверить до 500 аллергенов.

Для каждой пробы необходимо 50 мкл сыворотки или секрета. Для контроля точно­сти анализа и силы ответа используют стандартную сыворотку пациентов с аллергией. Содержания IgE относят к одному из классов по 4-6-балльной, но между концентрацией IgE и степенью проявления клинических симптомов нет прямой зависимости.

Эозинофильный катионный белок

Катионный белок эозинофилов (ЕСР) высвобожда­ется из активированных эозинофилов в результате их разрушения в ходе аллергической реакции; он обладает цитотоксическим и нейротоксическим действием. В норме, свободный ЕСР можно обнаружить в крови.

Количество ЕСР отра­жает степень активации эозинофилов, однако его уровень определяют в свернувшейся крови, в кото­рой эозинофилы подвергаются разрушению. В нор­ме количество ЕСР должно быть менее 105 нг/мл.

При некоторых заболеваниях в крови и других жидкостях организма определяется повышенное со­держания ЕСР:

• реакции гиперчувствительности немедленного типа
• паразитарные инфекции
• неаллергический ринит с эозинофильным синдро­мом (NARES)
• назальные полипы.

Уровень ЕСР — очень вариабельный показатель и не всегда повышен при аллергических ринитах. При противоаллергической терапии, например при прие­ме кортикостероидов, обычно наблюдается тенден­ция к снижению уровня ЕСР, что позволяет просле­живать течение болезни.

Триптаза

Триптаза высвобождается из тучных клеток в про­цессе реакций типа I – немедленные реакции, например, при анафилактическом шоке. Она более стабильна, чем гистамин, и легче идентифицируется.

Физиологические функции триптазы не совсем изучены, но предполо­жительно она, как и калликреин, участвует в синтезе брадикинина.

Уровень триптазы можно измерить в сыворотке крови или назальном секрет Этот пока­затель позволяет судить о степени активности туч­ных клеток. Тест достаточно новый и еще не входит в число широко используемых стандартных диагно­стических методов.

Тест дегрануляции базофилов

Тест дегрануляции базофилов (BDT) также известен как тест на высвобождение гистамина.

Из крови па­циента выделяют базофилы и смешивают их в тест-пробирке с предполагаемым аллергеном в течение 30 минут. Далее измеряют содержание гистамина. В качестве положительного и отрицательного контролей аналогичную процедуру проводят с кровью пациентов-аллергиков и здоровых людей.

Базофилы па­циентов с аллергическим заболеванием довольно чувствительны и часто процесс дегрануляции носит неспецифический характер.

Тест стимуляции клеток аллергеном

Тест стимуляции клеток аллергеном (CAST) аналоги­чен тесту BDT, но в этом случае измеряют количе­ство лейкотриенов (D4, C4 и Е4), высвободившихся из лейкоцитов. Так, как эти продукты синтезируются заново после воздействия специфического аллер­гена, то неспецифическая стимуляция вряд пи ока­жет действие на результаты теста.

CAST является более точным тестом по сравнению с измерением специфического иммуноглобулина Е (IgE) и применяется только для иден­тификации реакций типа I – немедленных реакций.

Иммунодиффузия при реакции типа III

Иммунодиффузия (метод Ухтерлони) используется для выявления таких антител, как антитела против сыворотки гопубя (легкие любителя птиц) и антитела против Aspergillus (легочный аспергиллез).

Тестируе­мая сыворотка наносится в лунку в центр чашки с агаром, а антигены в различных концентрациях по­мещают в лунки вокруг. Антигены и антитела начи­нают диффундировать через гель по направлению друг к другу.

В случае присутствия в тестируемой сы­воротке специфических антител, начинают формиро­ваться комплексы антиген-антитело, создавая ли­нию преципитации.

Перекрестный иммуноэлектрофорез и перекрестный радиоиммуноэлектрофорез

CIE (перекрестный иммуноэлектрофорез) и CRIE (пе­рекрестный радиоиммуноэлектрофорез) применяют для идентификации и стандартизации экстрактов ал­лергенов, используемых для кожной пробы уколом, провокационных тестов и гипосенсибилизации. CIE используется для определения разновидностей ан­тигена, a CRIE — для определения антигена.

Оба тес­та могут использоваться при мониторинге гипосен­сибилизации.