Проба Кумбса

Проба Кумбса – анализ для выявления антител прикрепленных к поверхности эритроцитов или растворенных в плазме. С его помощью выявляют иммунизированность и антитела к эритроцитам. Второе название антиглобулиновый тест. Бывает прямым и непрямым.

При прямом антиглобулиновом тесте определяет антитела фиксированные на поверхности эритроцитов. Проводится при подозрении на аутоиммунную гемолитическую анемию, при других аутоиммунных заболеваниях, после приема лекарств (метилдопа, пенициллин, хинин) и гемолитической болезни новорожденных.

Эритроциты были сенсибилизированы in vivo – к ним уже прочно прикреплены антитела, а добавление антиглобулиновой сыворотки (анти-IgG) вызывает склеивание сенсибилизированных клеток, что и видно невооруженным глазом.

Непрямая проба Кумбса выявляет антиэритроцитарные антитела в плазме крови, ее выполняют перед переливанием крови и при беременности.

Антиэритроцитарные антитела — вид аутоантител, т.е. антител против собственных же тканей. Аутоантитело возникает при патологической реактивности иммунной системы на некоторые препараты, например, на высокие дозы пенициллина.

Эритроциты на своей поверхности содержат различные химические структуры (гликолипиды, сахариды, гликопротеины и протеины), в медицине именуемые антигенами. Человек наследует от родителей определенную карту антигенов на каждой красной клетке крови.

Антигены объединены в группы и подле этого кровь делят на несколько групп — по системе AB0, резус, Келл, Левис, Кидд, Даффи. Самые известные и значимые в работе врача — AB0 и резус-фактор (Rh).

Система AB0

В системе AB0 антигены (аглютиноген) А и В расположены на мембране эритроцита, а в крови циркулируют аглютинины — альфа — α и бета — β. Аглютинин при контакте с аглютиногеном приводит к гемолизу, поэтому возможны следующие комбинации:

только αβ — I группа крови
A + β — II группа крови
B + α — III группа крови
A + B — IV группа крови

Варианты Aα и Bβ — невозможны.

Система Rh (резус-система)

Резус фактор — это сложная система, включающая более 40 антигенов на поверхности оболочки эритроцита, обозначаемых цифрами, буквами и символами. Чаще встречаются резус-антигены типа D (85 %), С (70 %), Е (30 %), е (80 %), они же обладают наиболее выраженной антигенностью — способностью стимулировать иммунную систему к синтезу антител. Система резус не имеет в норме одноимённых аглютининов (в плазме крови), но они могут появиться, если человеку с резус-отрицательной кровью перелить резус-положительную кровь.

Резус-принадлежность человека определяется наличием именно этих антигенов. Особо важный антиген эритроцитов – антиген D. Если он присутствует, то говорят о резус-положительной крови RhD, а если его нет – о резус-отрицательной Rhd.

Если к антигенам эритроцитов присоединится соответствующее антитело, то эритроцит разрушается – произойдет гемолиз.

Показания

Главное показание к прямому антиглобулиновому тесту — подозрение на гемолитическую анемию. Наиболее часто его проводят при первичной аутоиммунной гемолитической анемии, гемолизе при ревматических, опухолевых, инфекционных заболеваниях, гемолизе, вызванном лекарствами.

Если анемия появилась спустя несколько дней или месяцев после переливания крови или при длительной желтухе у новорожденого также делают прямую пробу Кумбса.

Непрямой антиглобулиновый тест выполняют перед переливанием крови и при беременности резус-отрицательной женщины.

Аутоиммунная гемолитическая анемия

Аутоиммунная гемолитическая анемия (первичная) – классическое аутоиммунное заболевание с неизвестными причинами. Нарушено взаимодействие внутри иммунной системы, что ведет к восприятию собственных эритроцитов как чужих. В лимфоузлах синтезируются антитела класса IgG (реагируют при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), которые присоединяясь к поверхности эритроцита запускают ряд ферментов (систему комплемента) и «продырявливают» стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу.

Первые симптомы обусловлены как разрушением эритроцитов, так и уменьшением гемоглобина. Среди них:

усталость, общая слабость, раздражительность
одышка
боль в животе и груди, тошнота
темный цвет мочи
боли в спине
желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек
увеличение печени, селезенки
снижение количества эритроцитов и гемоглобина в общем анализе крови

Положительный результат прямой пробы Кумбса на 100% подтверждает диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, доказывая ее аутоммунное происхождение. Одновременно отрицательный результат — не дает возможности снять диагноз.

Вторичная гемолитическая анемия

Вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия и положительная проба Кумбса могут быть при следующих заболеваниях:

системная красная волчанка
синдром Эванса
макроглобулинемия Вальденстрема
пароксизмальная холодовая гемоглобинурия
хронический лимфолейкоз
лимфомы
инфекционный мононуклеоз
инфицирование микоплазмой пневмонии
сифилис

Положительный антиглобулиновый тест при данных заболеваниях является одним из симптомов, а не критерием диагноза.

Гемолитическая болезнь новорожденного

Причина гемолитической болезни новорожденных — несовместимость группы крови у матери и плода, в большинстве случаев по системе резус, в одиночных — по системе АВ0, казуистично — по другим антигенам.

Резус-конфликт развивается, если у резус-отрицательной женщины плод унаследовал от отца резус-положительную кровь.

Заболевание у новорожденного развивается только в том случае, если мать уже выработала антитела к соответствующим антигенам, что бывает после предыдущих беременностей, родов, абортов, переливания несовместимой крови. Наиболее частая причина запуска синтеза антител к антигенам эритроцитарной оболочки — роды (фето-материнское кровотечение). Первые роды в основном проходят без осложнений, но последующие чреваты гемолитической болезнью новорожденного в первые дни после рождения.

Симптомы гемолитической болезни новорожденного:

желтушность кожи
анемия, бледность кожи и слизистых
увеличение печени и селезенки
нарушения дыхания
отек всего тела
возбуждение и постепенное угнетение центральной нервной системы

Анемия после переливания крови

Непрямую пробу Кумбса проводят перед переливанием крови для оценки совместимости, а прямую пробу Кумбса — после него при подозрении на посттрансфузный гемолиз, т.е. при наличии симптомов, таких как лихорадка, озноб, поливость (читай ниже). Цель анализа – выявить антитела к перелитым эритроцитам, которые связались с эритроцитами получившего кровь и являются причиной посттрансфузного гемолиза, а также преждевременного удаления донорских эритроцитов из кровообращения у реципиента (того, кто получил кровь).

Симптомы:

повышение температуры тела
сыпь на коже
боли в спине
красная окраска мочи
тошнота
головокружение

Расшифровка

Стоит напомнить, что принципиальные правила расшифровки прямого и непрямого антиглобулинового теста одинаковы. Единственное отличие — расположение антител — в крови или уже на эритроците.

если прямая проба Кумбса отрицательна – значит на эритроцитах не «сидит» антитело и причину симптомов следует искать дальше и провести непрямую пробу Кумбса
если положительный результат пробы Кумбса выявлен после переливания крови, инфекций, лекарств – положительность длится до 3 месяцев (время жизни эритроцитов 120 дней — 3 месяца)
положительный результат антиглобулинового теста при аутоиммунном заболевании длится месяцы и даже годы

Норма

прямая проба Кумбса — отрицательно
непрямая проба Кумбса — отрицательно

Качественно положительный результат измеряется в количестве плюсов от одного до четырех (+, ++, +++, ++++), а количественно в цифровом виде — 1:16, 1:256 и т.д.

Недостатки антиглобулинового теста

нельзя определить силу связывания антигена с антителом
неизвестно количество связанных антител
не определяет вид антитела
положительность пробы Кумбса не поможет определить ее причину
0,5% здоровых людей имеют положительную пробу Кумбса без каких-либо признаков гемолитической анемии
не подходит для контроля успешности лечения, поскольку не укажет активность гемолиза эритроцитов

Дополнительные исследования

общий анализ крови
анализ крови на ретикулоциты
микроскопия мазка крови
биохимический анализ крови — печеночные пробы (билирубин, АСТ, АЛТ, ГГТ, щелочная фосфатаза), почечные пробы (мочевая кислота, мочевина, креатинин)
ревмопробы — ревматоидный фактор, АСЛО, С-реактивный белок
СОЭ
гаптоглобин
железо в крови
ферритин
осмотическая резистентность эритроцитов
общий анализ мочи
анализ кала

Вопросы врачу

1. Возможна ли передача этих антител при донорстве крови?

Нет. При донорстве – донор отдает кровь, а не получает, поэтому нет возможности для появления антител.

2. 5-10-20 лет тому мне перелили кровь, стоит ли сейчас говорить об этом врачу перед новым переливанием крови?

Да. О том, что Вы получили трансфузию крови обязательно должен знать Ваш врач, поскольку она влияет на правильность расшифровки результатов анализов сейчас. При получении чужой (хоть и много раз проверенной крови) всегда существует вероятность того, что ваше тело выработает антитела против перелитой крови. Именно данные антитела окажут отрицательное влияние на состояние здоровья. При последующих переливаниях крови врач должен знать о том, что Вы уже получали трансфузии, а значит было время для синтеза антител. Для беременных женщин данная информация еще более актуальна.

3. Если несоответствие по резус-фактору между матерью и ребенку, будут ли больны все дети?

Зависит на резус-положительности или отрицательности ребенка (RhD). Носители группы крови I, II, III и IV могут быть как резус-положительны, так и отрицательны. В ситуации когда мать резус-отрицательна, а ребенок резус положителен – антитела будут вырабатываться уже с первой беременностью, но только после первых родов (или прерывания беременности) произойдет прямой контакт крови матери и ребенка. Реализация гемолитического влияния антител будет только при вторых и следующих родах, что приведет к гемолитической болезни у новорожденного.

Каждая женщина с отрицательным резус-фактором должна быть тщательно обследована во время беременности, а после родов проводится профилактическое лечение для предупреждения появления антител и дальнейших осложнений.

4. Во время беременности нужно ли знать группу крови мужа перед проведением пробы Кумбса?

Нужно не просто знать, но еще и проверить группу крови биологического отца ребенка во время беременности.

Факты

предложена впервые в Кэмбридже в 1945 году
порог чувствительности — не менее 300 фиксированных молекул антител на одном эритроците
число антител запускающих гемолиз — индивидуально для каждого человека (от 16-30 до 300)
динамика других лабораторных показателей гемолитической анемии (гемоглобин, билирубин, ретикулоциты) может нормализоваться, а проба Кумбса останется на том же уровне