Проточная цитометрия

Цитометрия поточная — это метод распознавания и подсчета единичных клеток, помеченных флюоресцирующими моноклональными антителами или внутриклеточными антигенами, ассоциированными с клеточным происхождением (например, Т-лимфоцитарное по сравнению с В-лимфоцитарным), клеточной функцией (наличие рецепторов цитокинов или других рецеп­торов), степенью зрелости (например, пре-В-клетки или зрелые В-клетки). Сегодня общий анализ крови делают методом проточной цитометрии.

Проточная цитометрия — метод исследования количества и качества клеток в ходе их перемещения через очень узкий капилляр.

Применение

Проточная цитометрия применяется для анализа образцов, включая перефирическую кровь, аспират костного мозга, с использованием основ­ных видов биопсии, в том числе тонкоигольной аспирационной биопсии (ТАБ), биопсии свежей ткани и всех жидкостей организма.

Проточная цитометрия в диагностике, характеристике и мониторинге злокачественных новообразований:

1. Дифференциальная диагностика лейкемии миелоидной от лимфоидной при острой и малодифференцированной формах.
2. Диагностика иммунодефицитов путем иммунофенотипирования; прогноз.
3. Диагностика пароксизмальной ночной гемоглобинурии.
4. Проточная цитометрия применяется в контроле за эффективностью терапии.
5. Определение минимальной резидуальной болезни в цереброспинальной жидкости или костном мозге.

Проточная цитометрия входит в алгоритм подсчета лимфоцитарных подтипов, например, CD4+ Т-клеток в качестве суррогатных маркеров прогрессирования ВИЧ-инфекции.

Использование анти-НbF-моноклональнх антител для определения HbF (можно определить менее 0,05% фетальных эритроцитов):

1. проточная цитометрия – более точный метод, чем мазок по Клейхауэру — Бетке для подсчета фетоматеринской кровопотери;
2. выявление увеличения доли эритроцитов, содержащих HbF (F-клетки), при гемоглобинопатии, у некоторых пациентов с миелодисплазией.

Проточная цитометрия применяется с целью

1. Диагностика пароксизмальной ночной гемоглобинурии, миелодисплазии и системных мастоцитозов.
2. Диагностика содержимого ДНК (анеуплоидия) и ДНК-синтезирующей активности опухолей (опре­деление степени злокачественности, например, при раке груди).
3. Проточная цитометрия определяет показатель апоптоза.
4. Определение мультилекарственной устойчивости в химиотерапии рака (например, устойчивость при чрезмерной экспрессии Р-гликопротеина и других белков).
5. Определение перекрестной гистосовместимости для трансплантации органов и стволовых клеток (при трансплантации печени в том числе).
6. Проточная цитометрия используется для определения числа CD34+ -клеток в периферической крови или трансплантате костного мозга, что коррелирует с успехом пересадки и длительностью гематопоэтического восстановления по­сле пересадки стволовых клеток.
7. Для определения клеточносвязанных антител и сортировки субпопуляций в их составе.
8. Подсчет ретикулоцитов (при анемиях, гиповитаминозах, для определения регенеративной актив­ности трансплантанта костного мозга). Также метод используют для определения индекса созре­вания ретикулоцитов и фракции юных ретикулоцитов (контроль анемий). Читайте о диагностике анемии в статье «Диагностика анемии. Какие анализы стоит сдавать?».
9. Определение человеческого лейкоцитарного антигена В27 (HLA-B27).
10. Определение антинейтрофильных антител, связанных с гранулоцитами или расположенных сво­бодно в плазме.
11. Исследование функции нейтрофилов при иммунодефиците (например, фагоцитоз, кислородный взрыв, иммунофенотипирование) и хронической гранулематозной болезни.
12. Митогенстимулированная оценка Т-клеток.
13. Определение функциональной активности тромбоцитов, например, оценка состояния и размещения наружного рецептора в диагностике врожденных функциональных расстройств тромбоцитов (gpIIb/IIIa при тромбастении Гланцманна; gplb при болезни Бернара — Сулье), показатель тромбоцитассоциированного IgG при иммунной тромбоцитопении и др.
14. Исследование выживаемости эритроцитов с использованием эритроцитов, меченных биотином вме­сто хрома-51.
15. Выявление внутриклеточных паразитов (Babesia, Plasmodium, Trypanosoma) с использованием РНК- и ДНК-связанных флуорохромов, которые связывают паразитов.

В трансфузионной медицине проточная цитометрия используется для:

1. Определение и подсчет низкого уровня иммуноглобулинов, связанных с эритроцитами и не опре­деляемых прямым антиглобулиновым тестом (прямая проба Кумбса) у пациентов с гемолизом.
2. Определение эритроцитарного химеризма.
3. Точное фенотипирование эритроцитов после многочисленных трансфузий.
4. Перекрестное взаимодействие с тромбоцитами.
5. Определение комбинации лейкоцитов в продуктах крови.

Цитометрия применяется при трансплантации:

1. Трансплантация стволовых клеток: соответствие числа CD34 у доноров или реципиентов.
2. Определение аллоантител к HLA при трансплантации органов.

В микробиологии цитометрия применяется для:

1. выявления специфических антител;
2. определения присутствия гетерогенных популяций с разной чувствительностью к антибиотикам.

Метод проточной цитометрии не рекомендуется для диагностики Ходжкинской лимфомы, хронического миелобластного лейкоза или миелодиспластического синдрома, но может использоваться для мониторинга последних двух патологий.